НОВОСТИ    БИБЛИОТЕКА    ССЫЛКИ    О САЙТЕ





предыдущая главасодержаниеследующая глава

Культуральные методы исследования состава почвенных водорослей

При выявлении видового состава водорослей используются разные варианты культурального метода. Задача культивирования в данном случае заключается в получении интенсивного роста всех имеющихся в почве водорослей, чтобы иметь достаточное количество особей каждого вида, находящихся на разных стадиях онтогенеза, для наблюдения, описания и идентификации. При этом обнаруживаются как виды, представленные активными стадиями, так и виды, сохраняющиеся в почве в покоющемся состоянии - в форме спор или цист. При постановке культур почвенных водорослей применяют общепринятые приемы микробиологической техники, касающиеся стерильности посуды, питательных сред, воды и инструментов. Инкубацию культур проводят обязательно на свету.

Наиболее простым методом для выявления состава почвенной альгофлоры является метод "стекол обрастания". Исследуемую почву, по возможности в ненарушенном состоянии, помещают в стерильные чашки Петри и в увлажненном состоянии выдерживают на свету. Для увлажнения применяют дистиллированную воду или минеральную среду (см. список наиболее употребительных сред).

На поверхность почвы (одновременно с постановкой культуры или на следующий день) раскладывают стерильные покровные стекла в количестве 4-8 на чашку. Поверхность почвы в чашке должна быть в мелких неровностях, ее не следует уплотнять и заглаживать. Между стеклами и почвой должны оставаться небольшие свободные пространства - "влажные камеры". Почву периодически увлажняют до 80% от полной влагоемкости. На нижней поверхности "стекла обрастания" начинается развитие водорослей, преобладающих в данной почве. Обычно уже через 4-5 дней можно начинать просмотр стекол под микроскопом. Для этого покровное стекло снимают с поверхности почвы пинцетом и, удалив с него крупные частички почвы, кладут на предметное стекло в каплю воды. Целесообразно просматривать не все стекла одновременно, а последовательно, с промежутками в 3-5 дней. Для полного выявления видового состава водорослей в почве достаточно 3-6 недель инкубации. К этому сроку стекла так интенсивно зарастают водорослями, что поселение каких-либо новых видов оказывается невозможным.

На стеклах обрастания быстро размножаются диатомеи, и стекла можно без дополнительных процедур попользовать для приготовления постоянных препаратов.

Для приготовления водных культур используют питательные среды, содержащие все необходимые для роста водорослей элементы, в частности, азот, фосфор, серу, магний, железо, калий, кальций и микроэлементы.

Разработано множество питательных сред, применительно к тем или иным группам водорослей (см. раздел Рецепты питательных сред) и техника различных культур.

Готовые питательные среды разливают по колбам из расчета 50-80 мл раствора на колбу емкостью в 100-150 мл. Удобнее всего пользоваться коническими колбами, но пригодна и другая посуда. Закупоренные ватными пробками колбы стерилизуют в автоклаве при 110° в течение 20 мин. Для посева берут определенную навеску почвы (обычно 1-2 г) или определенный объем почвы. Желательно применять принцип средней пробы из каждого данного образца и 2-3-кратную повторность культур. Можно засевать воздушно-сухую почву, но наилучшие сроки хранения, по-видимому, различны для неодинаковых почв и групп водорослей.

Развитие водорослей в водных культурах обычно становится заметным после 2-3 недель инкубации на свету. Наблюдается последовательность появления и исчезновения видов в культурах, что определяет необходимость многократного просмотра водорослей по мере их развития, начиная с трех недель и кончая 3-4 мес.

Для приготовления препаратов при изучении водорослей берут на предметное стекло пробы налетов и пленок со дна и стенок колб, с поверхности и из толщи раствора, соблюдая обычные приемы стерильности.

Агаровые культуры. Питательные среды с 1,5-2% агара применяются как для поддержания чистых культур, так и для выделения водорослей из почвы, которую наносят на поверхность агара в виде почвенного мелкозема (Громов, 1957). На агаре хорошо разрастаются диатомовые, зеленые и сине зеленые водоросли, в том числе спорообразующие формы, медленно растущие на стеклах. Поскольку вокруг каждой мелкой почвенной частицы вырастает немного видов водорослей, а иногда только один вид, то с агаровых культур легко выделить альгологически чистые культуры. Инкубация всех культур проводится на свету. Чаще всего для инкубации служат различной конструкции люминостаты.

Разные виды культур имеют свои достоинства и недостатки. Так, водные культуры, хорошо выявляя общий состав обитающих в почве водорослей, могут дать неправильное представление о количественных соотношениях между видами и о доминирующих формах. Коррективы в эти представления вносят почвенные культуры со "стеклами обрастания", выявляющие, в первую очередь, массовые и жизнедеятельные формы, или прямые наблюдения свежевзятой почвы. Необходимо учитывать, что во всех описанных культурах, особенно в почвенных, наряду с водорослями, хорошо развиваются протонема мхов, а иногда и заростки папоротников из спор, находящихся в почве.

Альгологически чистые культуры водорослей. Нередко для идентификации вида и изучения физиологических и экологических его особенностей необходимо получение альгологически чистых культур, т. е. культур, в которых содержится одновидовая популяция водорослей, но могут присутствовать разнообразные гетеротрофные организмы. Бактериологически чистые культуры, необходимые для физиолого-биохимических исследований, получить значительно труднее.

Выделение альгологически чистых культур производят разными способами: путем последовательных пересевов на агаровые среды и проведения материала через отдельную колонию с помощью обычной микробиологической техники; с помощью микропипетки, извлекающей из смеси водорослей отдельную клетку или колонию. Альгологически чистые культуры водорослей получают и на мембранных фильтрах, на которых из смешанной культуры выделяют с помощью волоска нужные клетки при просмотре под микроскопом.

Их хранят обычно в специальных коллекционных люминостатах при пониженной температуре на свету и периодически пересевают. Основные учреждения СССР, располагающие коллекциями почвенных водорослей: Биологический институт ЛГУ (ст. Петергоф), Ботанический институт АН СССР им. Комарова, Институт ботаники АН УССР, Институт микробиологии АН СССР, Кировский сельскохозяйственный институт (кафедра ботаники), Институт физиологии растений АН СССР.

предыдущая главасодержаниеследующая глава





© Злыгостев Алексей Сергеевич, подборка материалов, оцифровка, статьи, оформление, разработка ПО 2010-2018
При копировании материалов проекта обязательно ставить активную ссылку на страницу источник:
http://volimo.ru/ "VoLiMo.ru: Водоросли, лишайники, мохообразные в промышленности"