Приложение 2. Некоторые важнейшие реактивы и краски

Ниже дается перечень некоторых основных реактивов и красок, большая часть которых упомянута в предшествующем изложении. Приводятся только главнейшие реактивы и краски из тех, которые могут найти себе применение при определении водорослей.

Анилин Ганштейна.

Равные по весу части анилин-виолста и роз-анилина растворяются в равных объемах 96° спирта. Растворы смешиваются и выпариваются досуха. Осадок растворяется в воде, количество которой определяется исходя из того, что раствор должен быть 1%-ный.

Слизь красится в фиолетовый, а протоплазма - в розовый цвет. В розовый же цвет окрашиваются жгутики, становящиеся хорошо видимыми, если материал предварительно (до окраски) был фиксирован парами осмиевой кислоты.

Гематоксилин Бёмера.

1 г гематоксилина растворяется в 10 см³ 96° спирта. Отдельно приготовляется 200 см³ 10%-ного раствора калиевых квасцов. В течение нескольких дней мелкими порциями (сначала по каплям, а затем - по 0,5-1 см³) первый раствор прибавляется ко второму. Употребляться может не менее чем через 2 недели после изготовления. Перед употреблением обычно вдвое разбавляется водой.

Может применяться для окраски ядер в формалиновом материале при условии тщательной промывки его (в течение нескольких часов) в струе водопроводной воды.

Геицианвиолет.

К 1% или 2%-ному раствору уксусной кислоты прибавляют краски (в порошке), до темнофиолетовой окраски. Применяется и в водном растворе.

Может употребляться для окраски ядер; окрашивает также слизь, жгуты; иногда способствует выявлению формы хроматофоров.

Глицерин-желатин.

Одну весовую часть желатина в течение 2 часов размачивают в 6 весовых частях воды, прибавляют 7 весовых частей чистого глицерина и кристаллик карболовой кислоты. Нагревают до полного растворения желатина. Для осаждения мути прибавляют сырого яичного белка и фильтруют через нагретый фильтр (удобно пользоваться воронкой для горячего фильтрования), часто меняя бумагу. Остывший глицерин-желатин должен быть прозрачным. При употреблении расплавляют, опуская пробирку в сосуд с горячей водой. Применяется как среда при изготовлении постоянных препаратов.

Едкое кали (или едкий натр).

Употребляется в виде 5%-ного раствора для просветления объектов.

Жавелевая вода.

В 100 частях воды растирается 20 частей хлорной извести. Доливается 100 частей 15%-ного раствора углекислого калия (К₂СО₃). Через несколько часов стояния смесь многократно взбалтывается и фильтруется. К фильтрату прибавляется капля раствора углекислого калия. Если появится осадок, - значит в растворе есть излишек хлорной извести и тогда добавляют еще углекислого калия до прекращения появления осадка. После повторной фильтрации реактив готов к употреблению. Углекислого калия можно с самого начала взять несколько больше (так как его избыток не оказывает вредного, действия) и вместо фильтрации ограничиться простым отстаиванием смеси в хорошо закрытой склянке. Хранить в темноте.

Жавелевая вода сильно обесцвечивает и просветляет препараты. Может применяться для выявления строения оболочки в клетках водорослей (рекомендуется для десмидиевых водорослей А. А. Коршиковым, 1938). Для этого материал осаждается центрифугированием, жидкость сливается, наливается жавелевая вода и пробирка плотно закрывается. Срок пребывания в жавелевой воде - около 2 суток (для мелких клеток - 1 сутки). После жавелевой воды материал 2-3 раза промывается водой в той же пробирке, причем его каждый раз осаждают центрифугированием. Если в жавелевой воде, благодаря недостатку углекислого калия, остается известь, - ее можно удалить слабой соляной кислотой.

Квасцовый кармин.

3-5 г калийных (или аммиачных) квасцов растворяются в 100 см³ дестиллированной воды. Прибавляется 2 г мелкоистертого кармина. Кипятится в течение одного часа, после чего остужается и фильтруется. Во избежание развития плесени добавляется 1 см³ формалина или кристаллик тимола. Лучше употреблять в разведенном виде (раз в 5).

Окрашивает ядра в формалиновом материале при условии тщательной его промывки, осуществляемой так же, как и при окраске гематоксилином Бёмера.

Метиленовая синька.

Чаще применяются слабые водные растворы (0,1%-0,001%), служащие для прижизненного окрашивания, что способствует более отчетливой видимости объекта и его строения. Окрашивает слизь.

Нейтральная красная (нейтральрот).

Применяется для прижизненного окрашивания в столь же слабых разведениях, как и метиленовая синька. Способствует выявлению ядра, окрашивающегося сильнее, чем цитоплазма. Следует иметь в виду, что форма ядра при этом может изменяться.

Осмиевая кислота.

Употребляется в виде 1%-ного раствора, которым фиксируют объекты непосредственно в препарате, прибавляя фиксатор под покровное стекло, или, лучше, выдерживая препарат, не покрытый покровным стеклом и обращенный каплей вниз, над открытой банкой с раствором кислоты (в течение 1 минуты).

Для приготовления раствора промытая водой и насухо вытертая тряпкой (не прикасаться пальцами, так как осмиевая кислота легко разлагается в присутствии жира!) запаянная трубочка с реактивом надпиливается напильником, разламывается и целиком бросается в воду в склянку из темного стекла с притертой пробкой. При надламывании трубочку следует держать чистой тряпкой. Растворяется медленно, вследствие чего раствор следует применять не ранее чем через сутки после начала растворения.

Удобна для фиксации мелких, нежных объектов. Хорошо выявляет жгуты, особенно после последующей их окраски.

Осмиевая кислота служит реактивом на жиры (коричневое или черное окрашивание).

Раствор Люголя.

Представляет собой раствор иода в йодистом кали. Основной раствор содержит 1 г иода и 2 г йодистого кали на 300 см³ воды. Перед употреблением в большей или меньшей степени разбавляется дестиллированной водой. Иногда может быть заменен йодной тинктурой (раствором иода в спирту).

Может применяться для фиксирования подвижных объектов (непосредственно в препарате). Иногда способствует выявлению жгутов и ядер. Является реактивом на крахмал (синее окрашивание), для обнаружения которого следует применять слабый раствор.

Сафранип.

Можно употреблять водные растворы (например, 1%). Окрашивает слизь в оранжевый цвет.

Формалин.

Для фиксации обычно применяется 2-4%-ный раствор, приготовляемый путем разбавления продажного 40%-ного формалина в 10-20 раз. В целях нейтрализации часто присутствующей в нем примеси муравьиной кислоты полезно к фиксированным формалином пробам прибавлять но нескольку капель двууглекислой соды. В последнем нет надобности, если на дно бутыли, в которой хранится формалин, заблаговременно насыпать слой толченого мела (в несколько см толщиной) и бутыль время от времени встряхивать. Убедиться в том, что формалин имеет нейтральную реакцию, можно с помощью лакмусовой бумажки.

Фуксин кислый.

1%-ный водный раствор окрашивает пиреноиды и хроматофоры в красный цвет. Предварительно рекомендуется обработать объект спиртом для растворения хлорофилла.

Хлор-цинк-иод.

Химически чистый хлористый цинк прибавляют к раствору иода в йодистом кали до полного насыщения, чтобы на дне сосуда был избыток хлористого цинка. Можно готовить и иначе, а именно: 20 г хлористого цинка растворить при нагревании в 8,5 см³ воды, охладить и затем по каплям прибавлять раствор 1,5 г иода и 3 г йодистого кали в 60 см³ воды. Хранить следует в банке из темного стекла. Реактив на клетчатку (фиолетовое окрашивание).

Эозин.

В продаже существует два рода эозина, из которых один растворим в воде, а другой - в спирту (рекомендуется применять 70° спирт). Оба чаще употребляются в слабых (0,1%) растворах. Окрашивают протоплазму в розовый цвет. Могут применяться также для обнаружения пиреноидов, для чего рекомендуется 0,1%-ный спиртовый или крепкий водный раствор.